Định Mệnh Ánh Trăng xoay quanh cuộc gặp gỡ định mệnh của hai cô gái đến từ hai thời kỳ khác nhau. Duang Kaew là một công chúa từ thời Ayutthaya, còn Opal là một nữ trung tá của cục phòng chống tội phạm. Cuộc sống của họ đã thay đổi mãi mãi vào một đêm trăng tròn, khi Duang Kaew vô tình sử dụng chiếc vòng cổ cổ xưa để chữa bệnh cho mẹ.
Trong một diễn biến bất ngờ, linh hồn của Duang Kaew đã chuyển vào thân xác của Opal, còn linh hồn của Opal lại quay về quá khứ, vào thân xác của Duang Kaew. Từ đây, hai cô gái bắt đầu cuộc sống mới trong thân xác của nhau. Duang Kaew, nay trong thân xác của Opal, gặp Pipop – đồng nghiệp của Opal và dần cảm mến sự mạnh mẽ và điển trai của anh.
Trong khi đó, Opal, nay trong thân xác của Duang Kaew, gặp thái y Luang Osotwonwet và có những trải nghiệm mới. Liệu hai người có tìm cách trở về cuộc sống cũ, hay sẽ tiếp tục cuộc sống mới với những mối quan hệ và cảm xúc đang dần nở bloom.